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AFM用于各種微生物形態(tài)及其活動的研究

欄目:行業(yè)新聞 發(fā)布時間:2022-05-12

AFM的成象載體有很多種,如云母片、玻璃片、石墨、二氧化硅、生物膜等。生物樣品多選用云母片,因為它的解理性好,表面非常光滑平整,還可進行化學(xué)修飾。

與電鏡、X_線衍射等技術(shù)相比,AFM制樣簡單,制樣過程對樣品原始形態(tài)的影響小。在空氣或真空觀察時,可以將純化的樣品直接滴加到成象載體上,吸附一定時間后用濾紙吸干、自然晾干或氮氣吹干的方法去掉多余的水分,進行觀察。在液體中觀察時需要將樣品加入到專用的液體池中。

原子力顯微鏡可用于各種微生物形態(tài)及其活動的研究。如病毒、細菌、原蟲、支原體等。

以下僅舉幾例說明。觀察了4株金黃色葡萄球菌。無莢膜的2株細菌表面光滑,有莢膜的2株表面呈粘液狀,且通過對微莢膜形態(tài)的觀察,可以在鏡下區(qū)別這兩株細菌。

衛(wèi)星煙草花葉病毒是一種球形的RNA病毒,將病毒吸附在新鮮解理的云母片上,分別在空氣中和液體中用AFM觀察。測量高度得到病毒直徑為17nm,與X_線衍射結(jié)果一致。在PH8.0以下結(jié)晶時,STMV形成正交晶體或單斜晶體,病毒顆粒的大小為17nm,當(dāng)PH>8.0時,STMV結(jié)晶成立方晶體,病毒顆?!澳[脹”為18nm。

單純皰疹病毒是一種有包膜的病毒,大小約100nm。將病毒吸附在云母片上,由于脂蛋白膜的影響,病毒殼蛋白的亞結(jié)構(gòu)分辨不清;用去污劑處理后再觀察,可以清楚地見到殼蛋白的結(jié)構(gòu),甚至衣殼子粒中央的孔也可見到。觀察了痘苗病毒感染單個細胞的過程。作者用膜片鉗技術(shù)中的微細吸管固定住單個培養(yǎng)的猴腎細胞,將痘苗病毒加入培養(yǎng)液中,用AFM觀察不同時間后細胞和病毒的變化。加入病毒后,細胞變得光滑柔軟,提示在這種狀態(tài)下病毒易于穿過細胞膜。2h以后,細胞表面出現(xiàn)一些大小不一的隆起,逐漸增大,持續(xù)90s-10min后消失,分析是參與病毒組裝的蛋白顆粒的胞吐現(xiàn)象。6h后,細胞表面出現(xiàn)更大的隆起,約200-300min寬,數(shù)分鐘后突然消失,在細胞表面留下小的“癍痕”。比較以往的研究,認定這是第一子代病毒通過胞吐作用從細胞中排出。利用與Haberle相似的裝置對痘苗病毒感染猴腎細胞進行了更長時間的觀察,確認了病毒排出細胞時的胞吐現(xiàn)象。