細菌黏附是非常普遍和重要的生物學現(xiàn)象,細菌通過復雜的物理化學力的作用定植于細胞或基底表面。細菌生物膜的形成和結構維持及細菌對宿主細胞的入侵、破壞都與黏附性能密切相關。目前,原子力顯微鏡(AFM)結合單分子、單細胞力譜等技術在細菌黏附研究中應用廣泛,相比于傳統(tǒng)的細菌處理及檢測技術,原子力顯微鏡具有納米(nm)級空間分辨率及皮牛(pN)級力靈敏度,細胞處理簡單,并可以實現(xiàn)在生理環(huán)境下直接觀測細菌黏附的動態(tài)過程。近年來,原子力顯微鏡的功能越來越多樣化,性能不斷增強,如多頻原子力顯微鏡技術、實時高速原子力顯微鏡技術、力譜成像技術等,這些技術的進步推進了原子力顯微鏡在細菌黏附研究中的應用。本文將從原子力顯微鏡在分子生物學應用方面的最新發(fā)展和在細菌黏附研究中的應用兩方面進行闡述,為細菌黏附的研究提供新的方法和思路。
細菌黏附是細菌生物膜形成及致病的基礎和前提,包括細菌與基底、細菌與細菌、細菌與宿主細胞間的復雜的相互作用過程,主要依賴于黏附素與受體間的作用?;谠恿︼@微鏡的力譜技術可以從單細胞或單分子水平定量、直觀地測定非特異與特異性相互作用力,為細菌黏附性的研究提供了新的方法。
結合力譜技術對生物樣品間各種相互作用力的測量是原子力顯微鏡的另一重要功能,主要依賴于檢測“力-距離曲線”獲得相互作用力。原子力顯微鏡測得的力曲線服從poisson分布。poisson分析法可以估計細菌黏附力中單個化學鍵的強度,并在表面聚合物性質未知的情況下將整體作用力分解成特異性力和非特異性力進行分析?;谠恿︼@微鏡的力譜技術目前在細菌黏附力學研究中最前沿的應用是單分子力譜技術和單細胞力譜技術。既往細菌黏附研究多基于群體水平,近年來單分子力譜技術發(fā)展迅速,主要用于定量研究單細菌黏附力學特性等。新近研發(fā)出多巴胺涂層膠體探針,可以使單個活菌穩(wěn)定附著于微懸臂上,為細菌黏附力學研究提供了平臺。但目前單細胞力譜技術研究實用性低,局限性大,亟待進一步發(fā)展和推廣。
單分子力譜技術是定量探測分子內或分子間微小作用力的重要工具,單細胞力譜技術涉及復雜的功能化探針技術,并需要選擇適當?shù)奈锢砟P蛯y得的力曲線進行擬合分析。目前單細胞力譜技術與原子力顯微鏡成像、激光掃描共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡等技術結合應用成為新的發(fā)展趨勢,這在細菌黏附領域有著廣闊的發(fā)展和應用空間。
基于原子力顯微鏡的力譜技術發(fā)展越來越迅速,已成為國內外黏附力學研究的重要工具。但該技術仍存在諸多問題,如成本高、效率低、技術復雜、無法獲取菌體內部信息等,因此還需要更豐富的理論基礎與實踐應用。